反义HLA-A2和GDNF共表达逆转录病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 张海燕 徐群渊 李颖 杨慧 段德义
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Parkinson病 GDNF HLA-A2 基因治疗
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 103-107
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3827字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2005.02.001

摘要

为构建GDNF和反义HLA-42共表达的逆转录病毒载体,将人GDNF酶切片段(Xho Ⅰ/SalⅠ)克隆于逆转录病毒载体pLNCX2的Xho Ⅰ位点,再将HLA-A2 cDNA片段反向克隆于上述重组载体的Hind Ⅲ/Sal Ⅰ位点,对其作酶切鉴定和测序后转染PA317包装细胞系进行病毒的包装.收获重组病毒感染的NIH3T3并进行病毒滴度的测定,GDNF及HLA-42表达的RT-PCR检测,进一步感染人胚肺成纤维细胞,观察GDNF分泌情况.结果表明:GDNF和反义HLA-A2两片段的序列和插入方向完全正确,包装后获得的重组病毒的平均滴度为5×105CFU/ml.RT-PCR显示:在小鼠源性的PA317细胞中有人GDNF和HLA-A2的表达,ELISA法测得病毒感染人胚肺成纤维细胞上清液中GDNF含量为450 pg/ml.通过本实验,我们获得能共表达GDNF和反义HLA-A2的重组逆转录病毒,其转染的人成纤维细胞具有合成GDNF的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张海燕		3	17	3.0	3.0
2	徐群渊		12	34	4.0	5.0
3	段德义		4	5	1.0	2.0
4	杨慧		6	17	2.0	4.0
5	李颖		1	4	1.0	1.0