Endostatin基因转染人脐带血CD34+ 造血干细胞的实验研究

• 作者: 姜藻 胡洁
• 来源期刊: 现代医学
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录病毒 基因 脐带血 造血干细胞 血管内皮抑制素
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 158-161
• 页数: 4页
• 分类号: R730.5
• 字数: 2706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7562.2005.03.005

摘要

目的检测人endostatin(血管内皮抑制素)基因转染人脐带血CD34+造血干细胞后的表达和分泌情况.方法电穿孔法将Plncx/endo转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆后用NIH3T3细胞测定病毒的滴度,RT-PCR法测定耐药的包装细胞中是否存在endostatin基因.取新鲜人脐带血40～80 ml,用Ficoll分离出单个核细胞,再用免疫磁珠(MiniMACS)进一步分离出CD34+造血干细胞,流式细胞仪(FCM)检测CD34+造血干细胞的浓度和纯度.将病毒上清与人脐带血CD34+造血干细胞共同培养72 h,应用RT-PCR及Western blot检测人endostatin的表达和分泌.结果 Plncx/endo质粒克隆扩增后,经酶切鉴定有endostatin基因存在.RT-PCR证实,转染人endostatin基因的PA317/endo、NIH3T3/endo细胞中存在人endostatin特异性片段,病毒滴度为1.3×105 cfu·ml-1.FCM检测,CD34+干细胞在脐血中的初始含量＜5%,经Mini-MACS分离纯化后纯度超过90%.从1×108的界面细胞平均可以分离获得(5～20)×105CD34+个干细胞.RT-PCR证实,脐带血CD34+/endo造血干细胞基因组中含有人550 bp endostatin特异性片段, Western blot分析显示人endostatin在转染细胞中获得稳定表达和分泌.结论逆转录病毒可以介导endostatin基因转导人脐带血CD34+造血干细胞并表达endostatin蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜藻	东南大学附属中大医院肿瘤科	93	597	11.0	19.0
2	胡洁	东南大学附属中大医院肿瘤科	8	65	4.0	8.0