人脐带血CD34+细胞的提取及慢病毒载体转染的初步研究

• 作者: 史常旭 李彩霞 李玉艳 梁志清 潘静
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 脐血 CD34+细胞 慢疯毒载体 基因转染
• 年，卷（期）: 2008,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1570-1571,封2
• 页数: 3页
• 分类号: R392.4|Q78
• 字数: 2202字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2008.14.024

摘要

目的 探讨人脐带血CD34+细胞提取以及慢病毒转染的方法.方法 脐带血20袋,采用直接梯度离心法,或6%羟乙基淀粉沉淀加梯度离心法收集单个核细胞,检测CD34+阳性率,经MACS磁珠分离获得CD34+细胞,分为完全培养基组、增强感染剂(ENis)组,过夜培养,每组按MOI 1:1、1:10、1:50加入带GFP标记的慢病毒载体进行转染,每小组再分组分别加入0、1、5ng/mL polybrene,转染后36～48h,3、5、7d分剐在荧光显微镜下观察转染情况.结果 直接梯度法获得的单个核细胞中红细胞含量高,CD34+阳性率为0.8%VS 1.2%.MACS分离获得CD34+细胞阳性率达84.6%以上.转染后观察增强感染剂组感染率低于完全培养基组,以MOI 1:50组荧光最强,但细胞死亡较多,加入5ng/mL polybrene组细胞大片快速裂解死亡,荧光持续时间短,以MOI 1:10结合1ng/mL polybrene组阳性率高且荧光表达持续时间长.结论 MOI 1:lO结合1ng/mL polybrene可能是慢病毒转染较理想的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁志清	第三军医大学西南医院妇产科	272	2095	21.0	30.0
2	李玉艳	第三军医大学西南医院妇产科	85	784	17.0	23.0
3	史常旭	第三军医大学西南医院妇产科	147	999	16.0	22.0
4	潘静	第三军医大学临床血液教研室	52	435	10.0	19.0
5	李彩霞	第三军医大学西南医院妇产科	7	52	3.0	7.0