ST8SiaV基因启动子的克隆及功能鉴定

• 作者: 余涛 夏丽萍 宋红生 文铁桥 赵翠萍 陈付学
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: ST8SiaV基因 启动子 pGL3-Basic质粒 pGL3-Basic-GFP表达载体 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 248-250,253
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2005.03.013

摘要

目的:克隆ST8SiaV基因启动子及构建ST8SiaV基因启动子-pGL3-Basic-GFP表达载体,并对该载体进行功能鉴定.方法:①基于NCBI公布的大鼠基因组ST8SiaV基因序列,以SD大鼠肝基因组DNA为模板,采用PCR方法,扩增ATG起始密码子上游1.7 kb片段.②分离、纯化PCR产物,与pMD 18-T载体相连,构建克隆载体,转化大肠杆菌(DH5α),筛选阳性克隆并测序.③启动子片段进行SacⅠ和BglⅡ双酶切,克隆进pGL3-Basic质粒载体.为探索该基因在神经干细胞分化过程的活体表达,将pGL3-Basic的luciferase报告基因替换为GFP,构建成promoter-pGL3-Basic -GFP表达载体.④将构建的表达载体电转染SD大鼠神经干细胞,对该表达载体进行生物学功能鉴定.结果与结论:成功地克隆到1.7 kb的具有生物学活性的ST8SiaV基因启动子,并构建了适于活体研究的promoter-pGL3-Basic-GFP表达载体,为进一步研究该基因的启动子区转录及调控作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈付学	上海大学生命科学学院	32	91	6.0	8.0
2	文铁桥	上海大学生命科学学院	24	122	5.0	10.0
3	宋红生	上海大学生命科学学院	33	120	5.0	10.0
4	余涛	上海大学生命科学学院	6	21	2.0	4.0
5	赵翠萍	上海大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0
6	夏丽萍	上海大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0