应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响

• 作者: 刘国文 夏成 张乃生 张永亮 徐闯 李家奎 欧阳红生 王兴龙 王哲
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 丙酮酸羧化酶mRNA 竞争PCR 肝细胞 内含子
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 397-399,402
• 页数: 4页
• 分类号: S852.23
• 字数: 3577字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4545.2005.04.021

摘要

根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列,在其中再插入一外源DNA序列,从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度,成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板,然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响.使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1.5、2.5、3.5、4.5、8.5、11.5 mmol/L,处理24 h,提取总RNA、逆转录,在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带.结果表明,随着丙酸钠浓度的升高,PCmRNA水平呈上升趋势,提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响.