SARS-CoV刺突蛋白受体结合区的表达及高潜在中和性人源抗体的制备

• 作者: 包国强 姚西英 宋斐 张思河 李郁 杨勇 杨向民 陈志南 陈江浩
• 来源期刊: 科学技术与工程
• 学科: 医学
• 关键词: 严重急性呼吸综合征(SARS) 刺突蛋白 RBD 噬菌体抗体 Fab
• 年，卷（期）: 2005,（14）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 939-943
• 页数: 5页
• 分类号: R511
• 字数: 2803字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-1815.2005.14.004

摘要

为表达SARS-CoV刺突蛋白S(Spike)受体结合区(RBD)并从中筛选高潜在中和性人源抗体,我们用原核表达并纯化的SARS-CoV S RBD进行抗体库的筛选.从多个曾患SARS的健康人血中获得淋巴细胞,PCR扩增全部抗体基因,插入Pcomb3x载体中,构建抗SARS病毒人源噬菌体抗体库.利用噬菌体表面呈现技术,从中筛选结合SARS-CoV S RBD的人源抗体并用ELISA及Western blot鉴定阳性克隆,竞争ELISA检测人源抗体阻断SARS-CoV S RBD与其受体ACE2的结合情况.结果为构建了库容量6.2×107的免疫Fab噬菌体抗体库,重组率为75%,从中筛选获得9株特异抗SARS-CoV S RBD的人源Fab抗体,ELiSA及Western blot检测均为阳性.其中有一株能阻断SARS-CoV S RBD与其受体ACE2的结合.本实验结果表明:人源抗SARS-CoV S RBD基因工程抗体的获得,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防.