重组SARS-CoV核衣壳蛋白的表达纯化及其单克隆抗体的制备鉴定

• 作者: 余晓林 唐霓 张娟 郑建 陈维贤 陶鹏 黄爱龙
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: SARS-CoV 核衣壳蛋白 表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 741-745
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4825字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.08.013

摘要

目的 目的 表达纯化SARS冠状病毒(SARS-CoV)的核衣壳蛋白(nucleocapsid N蛋白),并制备出高安全性、高特异性的针对该蛋白的单克隆抗体(McAb),为SARS 的早期快速诊断提供有力的抗体工具.方法 在不接触病原体的前提下,采用全基因合成方式分别将SARS-CoV N蛋白编码基因第1-549位碱基(N端)和第496-1269位碱基(C端)直接合成至原核表达载体pET32a(+),表达、纯化重组蛋白(分别记为N1蛋白、N2蛋白),并以纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备特异性针对N蛋白的单克隆抗体,以间接ELISA法对所需的杂交瘤细胞株进行配对筛选,分析其亚类,以Western blot 和间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体特异性.结果 成功表达并纯化SARS-CoV N1、N2蛋白,筛选出7株抗SARS-CoV N1 蛋白及2株抗SARS-CoVN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定6株为IgG1,2株为IgG2b,1株为IgG3,Western blot及间接免疫荧光证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoV N蛋白发生特异性反应.结论 重组SARS-CoV N蛋白成功表达及纯化,并由此获得了SARS-CoV 特异性单克隆抗体,为SARS预防检测和发病机制研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余晓林	重庆医科大学检验系	10	12	2.0	2.0