牛妊娠相关糖蛋白基因boPAG4的原核表达及单克隆抗体的制备

• 作者: 张帅 张红星 祁文婧 谢远红 赵鑫 金君华
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 牛 妊娠相关糖蛋白 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 页码范围: 103-108
• 页数: 6页
• 分类号: Q784|S852.4+3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2019.0129

摘要

为了获得具有高特异性和高免疫原性的boPAG4单克隆抗体,本试验以PCR技术扩增荷斯坦奶牛boPAG4基因,构建重组质粒pCold TF-boPAG4后,在E.coli BL21(DE3)中表达pCold TF-boPAG4蛋白并优化.以重组蛋白pCold TF-boPAG4作为免疫原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合最终筛选出3株能稳定分泌pCold TF-boPAG4单克隆抗体的杂交瘤细胞,pCold TF-boPAG4单克隆抗体滴度均为1×105以上.纯化蛋白pCold TF-boPAG4经HRV3C蛋白酶酶切后制备出boPAG4抗原,Western blot(WB)结果显示,3种单克隆抗体都能特异性识别boPAG4抗原,pCold TF-boPAG4单克隆抗体的成功制备为开发现场奶牛妊娠ELISA检测系统提供了理论支持.