肠出血性大肠杆菌O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达

• 作者: 易勇 曾明 朱永红 毛旭虎 程建平 童文德 邹全明
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 紧密黏附素 紧密黏附素C-端免疫保护性片段 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 142-145
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3483字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.02.020

摘要

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7紧密黏附素(intimin)免疫保护性片段(intiminC300). 方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增紧密黏附素及其免疫保护性片段的编码基因eae与eaeC300,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-28a(+)-eae及pET-28a(+)-eaeC300,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测. 结果 PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增出了约2800 bp和900 bp的目的片段;原核表达质粒pET-28a(+)-eae及pET-28a(+)-eaeC300经酶切及测序鉴定与预期序列一致.转化E.coli BL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约25%和30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约96×103和35×103,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达. 结论 EHEC O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段经基因克隆后获得了较高的表达量,为进一步的生物学性质及免疫学特性研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾明		37	305	9.0	16.0