肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

• 作者: 丁红雷 宋方洲 杨琴 毛旭虎 王庆旭 邹全明 顾江
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Tir-细胞骨架偶联蛋白 基因表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 319-322
• 页数: 4页
• 分类号: R378.21
• 字数: 3543字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.04.002

摘要

目的 克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性.方法 采用PCR法自EHEC O157:H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达.表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体.抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析.结果 从EHEC O157:H7 Sakai菌株中克隆出了1 014bp的TccP基因.构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应.结论 在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157:H7致病机制中的作用奠定基础.