肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 温立斌 茅爱华 郭容利
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157:H7 转位紧密素受体 表达 粘附 A/E损伤 免疫保护
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 2570-2577
• 分类号: S8
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性.[方法]选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达.选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性.选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察.选用Balb/c小鼠进行免疫试验.[结果]成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应.表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤.二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上.[结论]在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究.