肠出血性大肠杆菌O157:H7EMA-PCR检测技术的建立

• 作者: 叶健强 叶勇刚 廖党金 曹冶 李江凌 王秋实 罗丹丹 谢晶 赵素君
• 来源期刊: 中国草食动物科学
• 学科: 农学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌 rfbE基因 EMA-PCR 死细菌 活细菌
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 疾病防控
• 页码范围: 50-53
• 分类号: S855
• 字数: 2885字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-3887.2012.04.016

摘要

肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌.为建立一种特异、灵敏的O157:H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157:H7活菌EMA-PCR检测方法.结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL.经EMA处理,从含有1％～100％O157:H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段.因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157:H7的EMA-PCR检测方法；该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高.O157:H7 EMA-PCR技术的建立为O157:H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖党金		69	317	11.0	13.0
2	赵素君		33	220	6.0	14.0
3	叶健强		36	78	5.0	6.0
4	谢晶		41	141	6.0	9.0
5	曹冶		30	77	4.0	6.0
6	李江凌		29	77	4.0	6.0
7	罗丹丹		17	35	4.0	4.0
8	王秋实		15	26	3.0	4.0
9	叶勇刚		28	49	4.0	4.0