抗弓形虫感染ROP2核酸疫苗的研究

• 作者: 刘克义 刘玉冰 崔勇 张佃波 李桂萍 李瑾 王洪法 韩广东 魏庆宽
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 ROP2基因重组 核酸疫苗 免疫保护作用
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1161-1167
• 页数: 7页
• 分类号: R531.8
• 字数: 5883字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9727.2005.06.001

摘要

目的研究弓形虫核酸疫苗,以用于弓形虫病的防治. 方法根据ROP2基因序列,设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物,扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体,然后再亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗;应用裸pc-DNA3-ROP2免疫小鼠,通过免疫学指标的检测,评价小鼠的免疫应答反应,最后应用弓形虫RH株攻击实验,评价出该疫苗的有效保护率、安全性和在人类及畜类的应用价值. 结果以ROP2基因为模板,PCR扩增出1.7kb DNA条带,与预想结果一致;将扩增DNA回收并成功的克隆了ROP2(PUCm-T-ROP2),然后亚克隆并构建了pc-DNA-ROP2重组体,通过酶切、PCR扩增和基因测序证明亚克隆的重组子正确,ROP2扩增基因包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列;在应用疫苗免疫接种小鼠结果显示,疫苗接种能使小鼠产生强烈的细胞、体液免疫反应;攻击实验结果显示,实验组小鼠的存活时间明显延长,并且开始死亡时间明显延迟(P＜0.001),实验组9只小鼠中有1只长期存活;在实验的整个过程中,没有发现小鼠对免疫接种的毒性和异常反应.结论该疫苗免疫原作用强,具有很好的开发应用价值,目前可在动物群体中试验应用.