弓形虫棒状体蛋白ROP2基因的克隆与表达

• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 棒状体蛋白ROP2 克隆表达
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 883-886
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5
• 字数: 2794字
• 语种: 中文

摘要

目的从弓形虫RH株总DNA中克隆棒状体蛋白ROP2基因片段,克隆至表达载体pET22b中,导入大肠杆菌中表达.方法采用半巢式PCR扩增法从基因组DNA中扩增编码ROP2基因片段,克隆至质粒pUC119中,经PCR和酶切鉴定后,进行DNA序列测定,并以SacⅠ/HindⅢ双酶切克隆至表达载体pET22b上,重组质粒pET22b-ROP2转化大肠杆菌BL21-Codon Plus (DE3)-RIL菌株中,经IPTG诱导表达.结果从弓形虫RH株总DNA中扩增到1.0kb的ROP2基因片段,构建成功重组质粒pUC119-ROP2,经DNA序列分析与已报道序列基本一致,重组质粒pET22b-ROP2在大肠杆菌中表达,产生一分子量约为45kDa的预期重组蛋白.结论克隆到的弓形虫棒状体蛋白ROP2在大肠杆菌中得到表达,构建成功的重组质粒pUC119-ROP2可用于下一步多基因融合的克隆操作.