弓形虫棒状体蛋白16的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 付涛 刘原 刘曼 吴亮 姜旭淦 曹建平 杨华 苏丹华 郭雪 陈盛霞
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 棒状体蛋白16 原核表达 KCl染色切胶
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 251-255
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4158字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y140296

摘要

目的：克隆刚地弓形虫 RH 株速殖子棒状体蛋白（rhoptry protein，ROP）16基因，并构建 ROP16基因的原核表达系统，检测和定位 ROP16蛋白的表达。方法：以弓形虫 RH 株速殖子基因组 DNA 为模板，PCR 扩增弓形虫ROP16基因，克隆至 pET-32a（＋）载体，在大肠埃希菌 Rosetta 中诱导表达。经 KCl 染色切胶法纯化重组 ROP16蛋白，并制备其兔多克隆抗体。采用蛋白质印迹法和间接免疫荧光法检测和定位 ROP16在弓形虫速殖子内的表达。结果：成功表达并纯化重组 ROP16蛋白，制备了其多克隆抗体。蛋白质印迹法检测出相对分子质量为74000的特异性条带，间接免疫荧光实验显示 ROP16分布于弓形虫速殖子胞质内。结论：经原核表达重组 ROP16制备的多克隆抗体能检测和定位 ROP16在弓形虫速殖子内的表达。