弓形虫沉默信号调节子2(TgSir2)的克隆表达与多克隆抗体制备

• 作者: 刘淑贤 华倩倩 张芳菲 曹佳欣 毛懿杰 王晨红 胡昕 谭峰
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 沉默信号调节子2 蛋白翻译后修饰 组蛋白去乙酰化酶 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 120-125,137
• 页数: 7页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.238

摘要

目的 制备特异识别弓形虫沉默信号调节子2 (TgSir2)多克隆抗体.方法 以酵母Sir2氨基酸序列为模板,寻找弓形虫基因组中同源序列,并进行信号肽预测.以弓形虫RH株cDNA为模板,构建pET28b-TgSir2重组质粒,转化入大肠埃希菌(E.coli) BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用镍柱亲和层析法纯化诱导表达产物,并以小鼠抗His标签单克隆抗体作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)进行鉴定.以纯化的TgSir2蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,获得特异性抗TgSir2多克隆抗体.最后,以此多克隆抗体作为一抗,Western blotting检测与虫体蛋白的反应情况.结果 同源比对找到弓形虫基因组中TgSir2,信号肽分析提示1-15位氨基酸为其信号肽序列.PCR、双酶切及测序结果证实原核表达质粒构建成功.SDS-PAGE结果表明,IPTG可诱导TgSir2融合蛋白的大量表达.Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体既能特异性识别原核表达的TgSir2蛋白,也能识别弓形虫体内的内源性TgSir2蛋白.结论 制备的抗重组TgSir2蛋白多克隆抗体能特异性识别弓形虫RH株的TgSir2蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭峰	温州医科大学基础医学院	9	15	3.0	3.0
2	华倩倩	东阳市人民医院检验科	2	4	1.0	2.0
3	张芳菲	温州医科大学仁济学院	1	1	1.0	1.0
4	王晨红	温州医科大学第二临床医学院	1	1	1.0	1.0
5	毛懿杰	温州医科大学仁济学院	1	1	1.0	1.0
6	刘淑贤	温州医科大学基础医学院	1	1	1.0	1.0