MDR逆转因子筛选技术P-gp细胞系的建立及其生物学特性评价

• 作者: 单保恩 张静
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 多药耐药 P-糖蛋白 基因转导 P-gp细胞系
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 389-391
• 页数: 3页
• 分类号: R730.1
• 字数: 3069字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2005.07.001

摘要

目的通过基因转导和药物诱导,建立稳定表达P-gp的细胞系,用于筛选特异性逆转P-gp的药物.方法 经RT-PCR反应得到小鼠肿瘤细胞P-gp DNA,转化大肠杆菌,构建并将质粒DNA转导逆转录病毒载体中,进而感染B-MD-C1细胞.采用Northern印迹法和流式细胞技术检测细胞P-gp mRNA和P-gp分子的表达;以MTT法分析细胞的增殖活性;应用药物聚集和排放实验检测其生物学活性.结果成功构建了稳定表达特异性P-gp基因和P-gp分子的B-MD-C1(ADR+/+)细胞系.经阿霉素诱导,B-MD-C1(ADR+/+)细胞P-gp的表达明显增高,在阿霉素增加至12 000ng/mL时,仍有80%的细胞保持良好增殖状态,而B-MD-C1(wt)细胞在1 000ng/mL时100%细胞死亡.B-MD-C1(ADR+/+)较(wt)细胞对MD-123有较低的聚集量和较高的排放量,加入P-gp逆转剂Verapamil后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞MD-123聚集量增加,药物外排作用消失.结论 B-MD-C1(ADR+/+)细胞系具有较强的药物耐受性,可用于筛选特异性逆转P-gp的药物,Verapamil可逆转P-gp耐药性,具有Verapamil特性者可视为具有逆转P-gp耐药性.