利用PCR介导的基因置换技术构建阿维链霉菌bkdF-突变株

• 作者: 吕和平 朱浩君 梁运祥 熊伟 郑应华 闵勇
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: PCR介导的基因置换 Red重组 阿维链霉菌 支链α酮酸脱氢酶基因(bkdF) 基因中断
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 672-678
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 字数: 4923字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2005.05.027

摘要

PCR介导的基因置换技术是一种利用λ噬菌体Red重组系统在微生物中进行基因中断的新方法.实验利用该方法快速构建基因中断载体,并成功地置换了阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)bkdF基因.先合成1对长度分别为58和59nt的引物,其5'端的39nt序列分别与bkdF基因两侧同源,3'端则分别与安普霉素抗性标记盒(aac(3)Ⅳ+oriT)两侧序列一致.以该引物扩增的PCR产物电转化能表达λRed重组酶且含有目标质粒的大肠杆菌(Escherichia.coli)菌株BW25113/pIJ790/pXW1224,获得了阳性重组质粒pXW1230.将该质粒中的大小为4.0kbBg1Ⅱ目的片段插入基因置换载体pHZ1351,再接合转移至阿维链霉菌BJBM9903,筛选得到表型为ApraRThios的接合子.PCR验证并对发酵产物进行HPLC和MS分析,证实该接合子为6kdF-突变株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闵勇	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	5	42	3.0	5.0
2	梁运祥	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	117	1602	22.0	36.0
3	吕和平		7	51	4.0	7.0
4	朱浩君	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	5	51	4.0	5.0
5	郑应华		14	148	7.0	11.0
6	熊伟	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	6	116	5.0	6.0