携带vIL-10的逆转录病毒重组体的构建及体外表达研究

• 作者: 唐福林 张宁
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 类风湿关节炎 基因治疗 逆转录病毒载体 病毒白介素 10
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 899-901
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2553字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带vIL-10表达序列的重组逆转录病毒rRV-vIL-10并检测该重组病毒对体外培养的兔滑膜细胞的转染情况和目的基因的表达水平.方法:①设计带有酶切位点的引物,对含有目的基因的质粒进行PCR扩增并纯化目的基因片段.②双酶切目的基因vIL-10与逆转录病毒载体pLXSN,将pLXSN与vIL-10进行定向克隆连接,筛出阳性克隆并进行鉴定.③扩增逆转录病毒重组体rRV-vIL-10,与辅助质粒pVSVG通过磷酸钙-共沉淀法共转染GP-293包装细胞,收集病毒并测定滴度.④将获得的重组逆转录病毒rRV-vIL-10转染体外培养的兔滑膜成纤维样细胞.细胞免疫组化测定目的蛋白的表达.结果:①成功构建了携带治疗基因的重组逆转录病毒rRV-vIL-10,病毒滴度为5×106 cfu/ml.②rRV-vIL-10能有效转染体外培养的兔滑膜成纤维样细胞,细胞免疫组化法可检测到vIL-10的表达.结论:①成功构建了携带治疗基因vIL-10的重组逆转录病毒rRV-vIL-10.②以逆转录病毒为载体可以成功地将vIL-10基因导入体外培养的兔滑膜成纤维样细胞并表达vIL-10蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张宁	中国医科大学附属第二医院风湿免疫科	93	556	13.0	19.0
2	唐福林	北京协和医院风湿免疫科	26	103	4.0	9.0