骨保护素基因修饰的Cos-7细胞系的培养与鉴定

• 作者: 吴迪 曹寅 梅陵宣 赵春晖
• 来源期刊: 实用口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨保护素 基因 克隆 载体 细胞表达
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 322-326
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.11
• 字数: 4177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-3733.2005.03.009

摘要

目的:构建pSecTag-opg真核分泌表达穿梭载体,培养经opg基因修饰的Cos-7细胞系并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供物质基础.方法:提取293细胞的总mRNA,设计和合成特异性引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增出具有抑制破骨细胞功能的opg基因cDNA,并将其重组到载体中测序;用脂质体法将目的基因转染至Cos-7细胞,应用免疫组织化学和Western blot方法证实转染的细胞表达OPG.结果:重组质粒pSecTag2/B-opg经PCR、Hind III单酶酶切及EcoR I和BamH I双酶酶切,电泳显示均能切下与预期大小相符的片段,经测序证实此基因与GenBank中[gi:33878056] 提供的序列完全一致;经免疫组织化学和Western blot方法检测,在转染opg基因的Cos-7细胞中有OPG表达.结论:成功构建了pSecTag2/B-opg分泌表达穿梭载体,并培养出高分泌表达OPG 的Cos-7细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梅陵宣	安徽医科大学口腔医学院	39	195	9.0	11.0
2	赵春晖	安徽医科大学口腔医学院	18	151	6.0	12.0
3	吴迪	安徽医科大学口腔医学院	14	55	5.0	6.0
4	曹寅	安徽医科大学口腔医学院	3	14	3.0	3.0