CB-GFP融合基因在COS-7细胞中的表达与定位

• 作者: 刘敏霞 周勇 孙红琰 孙萍 王全立 王嘉军 甘慧 高明
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 CB融合基因 重组蛋白质类 真核细胞 基因表达 共聚焦 转染
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 516-519,522
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2005.06.005

摘要

目的:构建以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-N1-CB,转染体外培养的COS-7细胞,以观察CB重组蛋白在真核细胞中的表达及定位.方法:PCR方法扩增得到去除终止密码的CB融合基因序列,克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,构建重组表达载体pEGFP-N1-CB.脂质体法转染体外培养的COS-7细胞后,以RT-PCR和Western印迹方法验证其mRNA及蛋白的表达,并在活细胞状态下用荧光显微镜、激光共聚焦显微成像技术直接观察CB-GFP融合蛋白在细胞中的分布和定位.结果:RT-PCR及Western印迹结果均证明CB-GFP融合基因表达载体pEGFP-N1-CB在COS-7细胞中获得了表达.荧光显微镜观察显示,在空载体pEGFP-N1转染组中,COS-7细胞内荧光呈弥散分布;重组质粒pEGFP-N1-CB转染组中,绿色荧光主要聚集在细胞浆中.结论:CB融合基因能在真核细胞COS-7中得到高效表达,且蛋白表达主要定位于细胞浆中,本试验为CB重组蛋白的提取及进一步功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙红琰	军事医学科学院野战输血研究所	20	155	8.0	12.0
2	王全立	军事医学科学院野战输血研究所	126	899	16.0	25.0
3	刘敏霞	军事医学科学院野战输血研究所	33	146	7.0	10.0
4	甘慧	军事医学科学院野战输血研究所	18	48	4.0	5.0
5	孙萍	军事医学科学院野战输血研究所	11	45	3.0	6.0
6	高明	军事医学科学院野战输血研究所	10	52	5.0	6.0
7	周勇	军事医学科学院野战输血研究所	27	103	6.0	9.0
8	王嘉军	军事医学科学院野战输血研究所	3	36	2.0	3.0