POAG相关基因MYOC cDNA的克隆及MYOC/GFP融合蛋白在真核细胞的表达与定位

• 作者: 吕建华 唐广贤 孙慧敏 季建 李筱荣 王庆瑛 王建文 郑建秋
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 基因 MYOC RT-PCR 重组质粒 青光眼
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 581-584
• 页数: 4页
• 分类号: R775
• 字数: 4191字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2006.08.006

摘要

目的克隆原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)相关基因MYOC cDNA,研究其编码的蛋白质在真核细胞系中的表达和定位.方法用RT-PCR法,从人眼组织(角膜缘、睫状体)中扩增MYOC cDNA,克隆入载体pGEM-T,然后酶切,定向克隆到真核表达质粒pEGFP-N3中,构建pEGFP-N3-MYOC重组表达质粒,然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定,最后通过脂质体包埋转染法,用pEGFP-N3-MYOC和pEGFP-N3质粒转染Hela和COS-7细胞,用荧光显微镜观察它们在Hela和COS-7细胞内的表达和定位.结果经酶切和DNA序列测定,证实重组质粒构建正确,荧光显微镜观察MYOC/GFP融合蛋白能在Hela和COS-7细胞中表达并且定位在细胞质中,而GFP分布在整个细胞内.结论成功克隆POAG相关基因MYOC cDNA,并且MYOC/GFP融合蛋白只表达在Hela和COS-7细胞质中,这为进一步研究POAG发病机制奠定了基础.