GFP-HPV16 E2及其删除突变体融合蛋白在真核细胞中的表达与定位

• 作者: 万艳平 唐双阳 李薇 陈杰 陈苏芳
• 来源期刊: 南华大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: HPV16 E2 定位
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 34-37
• 分类号: R37
• 字数: 2675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1116.2010.01.010

摘要

目的 构建人乳头瘤病毒16型E2(HPV16 E2)及其N端(TAD)、C端(DBD)删除突变体与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,观察其在Hela细胞中的表达与定位. 方法 HPV16 E2基因经PCR扩增后,与pMD-T载体连接,经蓝白斑筛选、PCR、双酶切鉴定及序列分析后,将E2基因亚克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2.PCR扩增TAD、DBD基因片段,将其双酶切后插入pEGFP-C1,构建荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD.将3种质粒转染Hela细胞,在荧光显微镜下观察融合蛋白的表达与定位. 结果重组载体经 PCR、双酶切鉴定及测序证明插入片段序列正确,且在Hela细胞中能表达目的 蛋白;GFP-E2融合蛋白在细胞核与细胞质中都有表达,但主要分布于细胞核;而 GFP-DBD融合蛋白仅在细胞核内;GFP-TAD融合蛋白仅在细胞质中. 结论 构建的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1/HPV16 E2、pEGFP-C1/TAD及pEGFP-C1/DBD均在Hela细胞中表达,并确定了各自在细胞内的定位.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万艳平	南华大学病原生物学研究所	157	780	13.0	20.0
2	唐双阳	南华大学病原生物学研究所	71	348	11.0	15.0
3	李薇	南华大学病原生物学研究所	6	17	3.0	3.0
4	陈杰	南华大学病原生物学研究所	20	30	3.0	4.0
8	陈苏芳	南华大学病原生物学研究所	3	15	2.0	3.0