人BCRP高效稳定表达COS-7细胞系的建立及其药物外排活性鉴定

• 作者: 张辉 戴仁科 王海峰 王珍玉 贾英 邓继峰 黄黎珍
• 来源期刊: 广东药学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 乳腺癌耐药蛋白 药物转运 COS-7
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 493-496
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2+1
• 字数: 3485字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-8783.2014.04.025

摘要

目的：建立乳腺癌耐药蛋白BCRP高效稳定表达COS-7细胞系,为相关药物的药物转运及其耐药性研究奠定基础。方法采用RT-PCR技术从MCF-7/ADR乳腺癌细胞中扩增出乳腺癌耐药蛋白基因BCRP的cDNA序列,插入真核表达载体pcDNA3.1(+),获重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP,将重组质粒pcDNA3.1(+)-BCRP转染COS-7细胞,经G418筛选后获得抗性细胞克隆。运用基因组PCR、SDS-PAGE鉴定抗性细胞中外源BCRP基因的整合及表达,并以BCRP底物mitoxantrone对鉴定阳性的细胞克隆进行转运活性验证。结果成功克隆BCRP的cDNA并构建真核细胞表达载体pcDNA3.1(+)-BCRP。转染COS-7细胞后获得抗性克隆10个,PCR鉴定阳性有4个,其中2个克隆能高效表达BCRP蛋白。经活性验证,2个高表达的细胞克隆中有一个能显著高效外排BCRP底物mitoxantrone,显示良好的生物活性功能。结论成功建立一株BCRP高效稳定表达的COS-7细胞系,且具有特异性生物活性,可用于BCRP相关药物转运及耐药性研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张辉	华南理工大学生物科学与工程学院	27	271	10.0	15.0
2	黄黎珍	华南理工大学生物科学与工程学院	3	0	0.0	0.0
3	戴仁科	华南理工大学生物科学与工程学院	9	10	2.0	2.0
4	王海峰	华南理工大学生物科学与工程学院	2	8	1.0	2.0
5	贾英	华南理工大学生物科学与工程学院	2	1	1.0	1.0
6	王珍玉		1	0	0.0	0.0
7	邓继峰	华南理工大学生物科学与工程学院	1	0	0.0	0.0