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摘要:
目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位.方法用RT-PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1-pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体pGEX-5X-1.诱导表达并纯化GST融合蛋白,利用改良的蛋白免疫法制备多克隆抗体;Western blot及免疫组化方法观察人肾组织的hUART1基因产物的表达.将hURAT1-pEGFP重组质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜动态观察hURAT1-pEGFP在肾小管上皮细胞LLC-PK1细胞膜的定位及表达.结果成功获得高效特异的hURAT1抗体,利用该抗体证实hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,Western blot证实hURAT1蛋白在肾组织中表达.激光共聚焦显微镜动态观察显示hURAT1-pEGFP定位于LLC-PK1细胞膜.结论制备的hURAT1抗体及其全长基因可用于hURAT1基因的生理功能及病理研究,hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘.
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篇名 人肾尿酸转运蛋白1基因克隆、抗体制备及其在肾小管上皮细胞中的定位
来源期刊 解放军医学杂志 学科 生物学
关键词 阴离子转运蛋白质类 尿酸 荧光抗体技术 抗体
年,卷(期) 2005,(5) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 397-400
页数 4页 分类号 Q781
字数 3694字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:0577-7402.2005.05.012
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研究主题发展历程
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阴离子转运蛋白质类
尿酸
荧光抗体技术
抗体
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
解放军医学杂志
月刊
0577-7402
11-1056/R
大16开
北京100036信箱188分箱
2-74
1964
chi
出版文献量(篇)
8116
总下载数(次)
11
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
国家重点基础研究发展计划(973计划)
英文译名:National Basic Research Program of China
官方网址:http://www.973.gov.cn/
项目类型:
学科类型:农业
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