人肾尿酸转运蛋白1基因克隆、抗体制备及其在肾小管上皮细胞中的定位

• 作者: 丁瑞 侯剀 冯哲 吴镝 张晓洁 张萍 洪权 许国双 陈香美
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 阴离子转运蛋白质类 尿酸 荧光抗体技术 抗体
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 397-400
• 页数: 4页
• 分类号: Q781
• 字数: 3694字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2005.05.012

摘要

目的制备人尿酸转运蛋白1(hURAT1)多克隆抗体并利用该抗体检测hURAT1在肾组织中的表达及亚细胞定位.方法用RT-PCR方法从人肾组织中扩增出hURAT1基因全长及其抗原表位区,分别构建绿色荧光蛋白hURAT1-pEGFP融合表达载体和GST融合表达载体pGEX-5X-1.诱导表达并纯化GST融合蛋白,利用改良的蛋白免疫法制备多克隆抗体;Western blot及免疫组化方法观察人肾组织的hUART1基因产物的表达.将hURAT1-pEGFP重组质粒转染细胞,激光共聚焦显微镜动态观察hURAT1-pEGFP在肾小管上皮细胞LLC-PK1细胞膜的定位及表达.结果成功获得高效特异的hURAT1抗体,利用该抗体证实hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘,Western blot证实hURAT1蛋白在肾组织中表达.激光共聚焦显微镜动态观察显示hURAT1-pEGFP定位于LLC-PK1细胞膜.结论制备的hURAT1抗体及其全长基因可用于hURAT1基因的生理功能及病理研究,hURAT1基因编码产物分布于人肾组织近端肾小管刷状缘.