人胆酸转运蛋白基因的克隆、亚细胞定位及其在肾组织中的表达

• 作者: 侯剀 傅博 冯哲 师锁柱 白雪源 罗成华 陈香美 马玉香
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 胆汁酸类 肾小管 亚细胞定位 载体蛋白质类
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 335-339
• 页数: 5页
• 分类号: Q493.8.Q735
• 字数: 4325字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.02.027

摘要

目的:克隆人肾与小肠ASBT(顶端Na+/胆汁酸协同转运蛋白)基因并比较2者的序列差别,明确ASBT蛋白在肾小管上皮的亚细胞定位及在人肾组织中的表达情况.方法:从人肾和小肠组织中提取总RNA,然后用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增ASBT全长cDNA基因并测序,并将其插入真核表达载体中构建ASBT蛋白真核表达载体,然后将其转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达并用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况.用免疫组化技术观察ASBT在人肾组织中的表达分布.结果:序列分析结果表明肾小管ASBT基因的序列与小肠ASBT序列完全一致.Western blotting表明ASBT基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达.共聚焦显微镜分析显示正常ASBT蛋白主要定位于肾小管上皮细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致.免疫组化染色表明ASBT蛋白主要表达于人近端肾小管上皮的刷状缘侧,在间质及远端小管没有表达.结论:人肾小管ASBT基因序列与小肠ASBT相同,ASBT蛋白主要表达于近端肾小管上皮细胞管腔侧细胞膜.