携带幽门螺杆菌ureB和IL-2质粒DNA的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗构建

• 作者: 孙波 屠振兴 徐灿 李兆申 杜奕奇 杨骅 许国铭 金晶 龚燕芳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 尿素酶 疫苗 IL-2 鼠伤寒沙门菌
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 234-238
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5441字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.03.019

摘要

目的构建编码幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)尿素酶B亚单位(ureB)基因和小鼠IL-2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗,体外转染Cos-7细胞,鉴定其表达蛋白的免疫性. 方法应用聚合酶链式反应(PCR)技术从H.pylori标准菌株CCUG17874基因组DNA扩增ureB基因,从重组质粒pCIneo-IL-2扩增小鼠IL-2基因,通过T-A克隆分别插入pUCmT载体,检测ureB及IL-2的核苷酸序列,通过酶切、连接反应分别克隆入真核表达载体pIRES,PCR和酶切反应进行鉴定;重组载体pIRES-ureB和pIRES-ureB-IL-2转入减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,再次转入SL7207,反复传代,鉴定核酸疫苗载体菌的稳定性.通过脂质体法将重组载体pIRES-ureB和pIRES-ureB-IL-2转染Cos-7细胞,SDS-PAGE及Western blot法检测表达蛋白的免疫性. 结果扩增出长约1700 bp的ureB基因和510 bp IL-2,测序结果表明,扩增出的ureB基因与基因库H.pylori ureB序列一致,IL-2序列和小鼠的IL-2序列一致,PCR和酶切鉴定结果证实ureB和IL-2基因克隆入真核表达载体pIRES,并成功构建了稳定的幽门螺杆菌ureB和IL-2基因以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗,并且以Western blot检测到特异性的相对分子质量(Mr)为66×103的UreB蛋白和14×103的IL-2蛋白条带. 结论构建了编码幽门螺杆菌ureB和免疫佐剂IL-2基因的以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的核酸疫苗,体外实验证实可表达具有免疫原性的抗原蛋白和佐剂蛋白,为进一步探索其体内的免疫作用奠定了基础.