应用m2-Gi1α融合蛋白鉴别M2受体的特异性药物

• 作者: 刘洪瑞 叶洪飞 王海波 郭政东 郭政礼 韩雪松
• 来源期刊: 中国药学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 毒蕈碱乙酰胆碱受体 GTP结合蛋白 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 868-872
• 页数: 5页
• 分类号: R962
• 字数: 4792字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-2494.2005.11.024

摘要

目的表达m2-Gilα融合蛋白,通过检测GDP与m2-Gilα融合蛋白的亲和力大小来鉴别m2受体的特异性激动剂、拮抗剂和反向激动剂.方法用两步PCR反应重组m2-Gilα融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达M2受体蛋白和m2-Gilα融合蛋白,通过[3H]QNB结合饱和实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP与m2-Gilα融合蛋白的亲和力.结果m2-Gilα融合蛋白表达水平是(18.14±0.17)pmol·mg(膜蛋白)-1.m2-Gilα融合蛋白与[3H]QNB的结合量随着[3H]QNB浓度的升高而增加,10 μmol·L-1GTPγS使m2-Gilα融合蛋白与[3H]QNB的饱和结合曲线明显下移.Ach使m2-Gilα融合蛋白与[35S]GTPγS竞争性替代结合曲线明显右移,Pilo稍次之,alcuronium,AF-DX116,Iso及atropine则使曲线左移,GDP的IC50值分别是168.4,152.3,6.84,6.12,5.59,4.52μmol·L-1,无配体存在时为14.7 μmol·L-1.结论表达的m2-Gilα融合蛋白具备M2配体结合的特性及G蛋白耦联受体的信号转导功能,对于有基础活性的m2-Gilα融合蛋白,Ach,Pilo是完全激动剂;atropine,alcuronium,Iso和AF-DX116为拮抗剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王海波	中国医科大学基础医学院病理生理教研室	18	52	4.0	6.0
2	叶洪飞	河北省玉田县医院外科	2	4	2.0	2.0
3	郭政东	中国医科大学基础医学院药理教研室	24	107	6.0	10.0
4	刘洪瑞	中国医科大学天然药物研究室	18	108	5.0	10.0
5	韩雪松	中国医科大学基础医学院药理教研室	7	61	3.0	7.0
6	郭政礼	沈阳市中心医院药剂科	2	4	2.0	2.0