M_2-G_（i1α）融合蛋白在Sf9细胞中的表达及M_2AChR特异性药物的鉴别

• 作者: 姜爱民 孙科 张雪薇 白立川 郭政东
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白 毒蕈碱型乙酰胆碱受体 G蛋白耦联受体 兴奋剂 拮抗剂
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 428-431
• 分类号: R962
• 语种: 中文

摘要

目的通过杆状病毒-Sf9细胞系统表达M2-Gi1α融合蛋白,并利用M2-Gi1α融合蛋白为工具筛选毒蕈碱性乙酰胆碱受体亚型2（M2AChR）特异性配体,探讨M2-Gi1α融合蛋白中两组分相互作用的机制。方法通过两步PCR反应建立M2AChR与Gi1α融合cDNAs,并在Sf9昆虫细胞中表达M2-Gi1α融合蛋白。通过[3H]羟苯二乙酸奎宁酯（[3H]QNB）配体饱和结合实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测M2-Gi1α融合蛋白表达水平,并筛选M2AChR的特异性配体。结果 M2-Gi1α融合蛋白的表达水平为（8.44±0.39）nmol·g-1膜蛋白。不同配体使M2-Gi1α融合蛋白中Gi1α与GDP的亲和力发生变化,乙酰胆碱、氧化震颤素、槟榔碱、阿托品、fangchinoline、levitimide的IC50值分别为：21.35,23.86,11.91,0.13,1.05,1.75μmol·L-1,无配体存在时为2.50μmol·L-1。结论杆状病毒-Sf9细胞表达系统表达的M2-Gi1α融合蛋白具备M受体与配体结合的特性和组分间的耦联功能,通过检测GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2受体亚型特异性药物。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭政东	中国医科大学药学院天然药物学研究室	24	107	6.0	10.0
2	白立川	中国医科大学药学院天然药物学研究室	6	42	2.0	6.0
3	张雪薇	中国医科大学药学院天然药物学研究室	3	17	1.0	3.0
4	孙科	中国医科大学药学院天然药物学研究室	3	13	1.0	3.0
5	姜爱民	中国医科大学药学院天然药物学研究室	2	0	0.0	0.0