具有生物学活性的hMSH2蛋白在昆虫sf9细胞中的表达

• 作者: 何小鹃 何维 崔莲仙 李峥 陈慧
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: hMSH2蛋白 昆虫病毒载体表达系统 γδ细胞
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 670-675
• 页数: 6页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3035字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6325.2008.07.004

摘要

目的 表达具有生物活性的hMSH2蛋白.方法 用搭桥PCR获得hMSH2全长基因,构建pAcGP67B-hMSH2重组质粒,与AcNPV昆虫病毒DNA共转染昆虫细胞sf9,表达hMSH2蛋白(同时构建pET30a-hMSH2重组质粒,用大肠杆菌表达hMSH2蛋白);Western blot鉴定hMSH2蛋白;ELISA,流式细胞仪检测蛋白与OT3肽及TCRγδ的结合特异性;检测细胞增殖(MTT法)和细胞因子分泌,观察重组蛋白体外活化γδT细胞的生物学功能.结果 克隆到正确的hMSH2基因,并将其插入到表达载体pAcGP67B和pET30a中的正确位置.经Western blot鉴定获得了hMSH2蛋白.用昆虫病毒表达载体系统表达的hMSH2蛋白能与其探针肽OT3及TCRγδ特异性结合,并能在体外刺激γδ细胞增殖及分泌IFN-γ,其活性更优于原核表达的蛋白.结论 成功利用昆虫病毒载体表达系统得到了比原核大肠杆菌表达系统更具生物活性的hMSH2蛋白.