人穿孔素在sf9昆虫细胞中的表达和纯化

• 作者: 刘孟雨 周雅博 梁晓雨 解静 陈风晔 黄波
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白纯化 人穿孔素 蛋白活性 打孔
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 54-59
• 页数: 6页
• 分类号: Q81
• 字数: 3720字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立重组人穿孔素的表达和快速纯化方法.方法 在sf9昆虫细胞内表达带His标签人穿孔素.使用人工制作简易的镍(Ni)柱装置进行蛋白质亲和层析.采用考马斯亮蓝染色、银染法及流式细胞计量术纯化的蛋白分析其理化性质;用人乳腺癌细胞MCF-7的PI染色法鉴定其生物学活性.结果 纯化出的穿孔素具有在细胞膜打孔的生物学活性.与常规蛋白纯化方法如离子交换色谱、分子筛和疏水作用层析等方法相比,该方法操作简便、成本低,为人穿孔素接下来的研究以及其他蛋白质的纯化提供一定参考.结论 以一种简单的方法在sf9昆虫细胞内表达并纯化出了有活性的人穿孔素.