日本血吸虫热休克蛋白70在昆虫细胞 Sf9中的表达鉴定

• 作者: 冯新港 刘群 徐瑞敏 李运燕 杨健美 段明明 苑纯秀
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 日本血吸虫 热休克蛋白 70 杆状病毒/昆虫表达系统 表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 45-50
• 页数: 6页
• 分类号: S852.735
• 字数: 3851字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达日本血吸虫热休克70蛋白(SjHSP70)，获得重组的 rSjHSP70蛋白。利用 PCR 技术从日本血吸虫 cDNA 文库中克隆 SjHSP70全长序列；亚克隆到 pFastBacHTA 中，构建重组杆状病毒转移载体pFastBacHTA-SjHSP70，导入 DH10Bac 感受态细胞，得到重组穿梭质粒 reBacmid-SjHSP70，再转染到 Sf9昆虫细胞制备重组病毒；将重组病毒感染细胞，用间接免疫荧光技术鉴定重组蛋白的表达；His 柱亲和层析法纯化目的蛋白；Western blot 技术对纯化蛋白进行抗原性鉴定。SjHSP70基因全长序列1962 bp，在 Sf9昆虫细胞中获得高效表达；His 柱亲和层析法纯化表达的蛋白可被日本血吸虫感染小鼠的阳性血清识别。用杆状病毒昆虫细胞表达系统成功表达了 SjHSP70，为深入研究 SjHSP70分子的免疫生物学功能提供了材料。