RSV编码的4种蛋白在"AcMNPV-sf9昆虫细胞"体系中的重组表达

• 作者: 何柳 吴祖建 林奇英 林董 谢联辉 谢荔岩
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 水稻条纹病毒 苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 草地贪夜蛾细胞 杆状病毒表达系统
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 269-274
• 页数: 6页
• 分类号: S432.4+1|Q782
• 语种: 中文

摘要

应用反转录聚合酶链式反应( RT- PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、 pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、pFastBacHTb-NS3、pFastBacHTb-CP和pFastBacHTb-SP).序列测定表明,目的基因准确地插入到表达载体中.重组质粒pFastBacHTb-X通过转化包含有穿梭载体的大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH10Bac,得到重组穿梭质粒rb-X(rb-NS2、rb-NS3、rb-CP和rb-SP).rb-X侵染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞(sf9)24-72 h后,在荧光倒置显微镜可见光200倍视野下观察到细胞增大、培养液和细胞内出现颗粒状物质、部分细胞破裂甚至裂解等一系列与正常sf9细胞形态有明显区别的现象.rb-X侵染细胞72 h后,从细胞提取蛋白,电泳分析得到4个条带,大小分别为28.2、29.2、40.2和25.2 ku,与预测的4种融合蛋白大小一致.Western blotting分析分别得到4条单一条带,证明了RSV NS2、NS3、CP和SP基因在"AcMNPV-sf9昆虫细胞"真核表达体系中成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林奇英	福建农林大学植物病毒研究所	152	2641	29.0	42.0
2	谢联辉	福建农林大学植物病毒研究所	184	3024	29.0	43.0
3	吴祖建	福建农林大学植物病毒研究所	166	2128	26.0	36.0
4	谢荔岩	福建农林大学植物病毒研究所	45	610	17.0	23.0
5	何柳	福建农林大学植物病毒研究所	4	30	3.0	4.0