人Cosmc胞外段蛋白在昆虫细胞Sf-9中的表达与纯化研究

• 作者: 张小秦 莫茜 谢秋玲 金燕樑 陶悦
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人Cosmc 胞外段 昆虫细胞 杆状病毒表达系统 表达纯化
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 临床免疫学
• 页码范围: 1507-1511,1518
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.021

摘要

目的：：利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达人Cosmc胞外段蛋白，为体外研究Cosmc蛋白的结构和功能奠定基础，同时也为 O-连接糖基化及相关疾病的研究提供思路。方法：采用 Bac-to-Bac 系统，构建重组转移质粒pFastBac1-Cosmc extracellular domain(pFastBac1-Cosmc ED)，转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定，获得重组转座子rBacmid-Cosmc ED。在脂质体介导下，重组病毒感染Sf-9无血清细胞，在Sf-9中表达Cosmc 胞外段蛋白，由于Cosmc N端加有昆虫细胞信号肽HBM( Honey Bee Melittin)且不含有跨膜段，所以Cosmc胞外段蛋白表达后分泌到培养基上清中，通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测，并通过Ni-NTA亲和层析柱对其进行纯化分析。结果：SDS-PAGE和Western blot分析显示得到一条分子量约为33 kD的特异性条带，与目的蛋白大小相符，质谱结果进一步证明所得蛋白为Cosmc胞外段蛋白。结论：Sf-9细胞中可成功表达Cosmc胞外段蛋白，为进一步研究Cosmc的结构和功能奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金燕樑	上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心风湿免疫科	17	125	6.0	10.0
2	莫茜	上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心风湿免疫科	9	3	1.0	1.0
3	陶悦	上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心风湿免疫科	7	19	2.0	4.0
4	张小秦	上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心风湿免疫科	2	1	1.0	1.0
5	谢秋玲	上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心风湿免疫科	1	1	1.0	1.0