靶向腺病毒载体介导的EGFP基因在甲胎蛋白阳性肝癌细胞的特异表达

• 作者: 刘长安 彭勇 李旭宏 梅英 石毓君 米粲 霍艳英 龚建平
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲胎蛋白类 启动区(遗传学) 腺病毒载体 HepG2细胞
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 159-162
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 1987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2005.01.036

摘要

目的:建立一种在甲胎蛋白(AFP)阳性的肝癌细胞中靶向表达目的基因的重组腺病毒载体.方法:基于腺病毒载体Adeno-XTM Expression system,以300 bp AFP特异启动子替换穿梭质粒Pshuttle中CMV启动子,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因亚克隆至Pshuttle,HEK293细胞包装腺病毒,收集病毒后分别转染人正常肝脏LO2细胞,人肝癌HepG2细胞及HeLa细胞;通过Northern杂交检测EGFP基因在3种细胞中的转录水平,荧光显微镜下观察3种细胞中绿色荧光蛋白的表达.结果:Northern杂交显示,HepG2细胞中有大量EGFP基因的转录,而正常肝细胞LO2和HeLa细胞中仅能检测到微量基因的转录;荧光显微镜检测发现HepG2细胞内有强绿色荧光表达,而在LO2以及HeLa细胞内见极弱绿色荧光.结论:在AFP特异启动子作用下,腺病毒携带的目的基因在AFP阳性的肝癌细胞中得到显著转录和表达,而在非AFP阳性细胞仅微量转录,蛋白表达极弱.该腺病毒载体可作为AFP阳性的肝癌基因靶向治疗的适宜载体.