体外转录法制备SARS冠状病毒RNA片段

• 作者: 光丽霞 周世文 张克斌 戢福云 钱桂生
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: SARS冠状病毒 RNA片段 体外转录 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2005,（24）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 2472-2474
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 4107字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2005.24.025

摘要

目的通过体外转录获得SARS冠状病毒RNA片段,为建立RT-PCR和荧光定量PCR诊断方法提供阳性对照.方法根据GenBank登录SARS冠状病毒Tor2株基因组序列,选择基因组中18138-18327nt作为目的扩增序列,并将其分解为首尾重叠的3个片段,人工合成对应的单链DNA序列,通过退火延伸获得全长dsDNA片段,PCR扩增该片段后,连接至载体pMD18T上,筛选含目的插入片段的阳性重组质粒pMD 18T-SARS,用BamH Ⅰ和HindⅢ切出目的片段,连接至线性化表达性质粒pGEM上;筛选阳性重组质粒pGEM-SARS,测序鉴定后,经HindⅢ酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,得到含SARS冠状病毒目的序列的RNA片段,转录产物经电泳观察后,用RT-PCR验证.结果获得含SARS冠状病毒目的基因序列的RNA片段.结论该RNA片段可用于SARS冠状病毒RT-PCR和荧光定量RT-PCR诊断方法的阳性对照.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱桂生	第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室	591	5662	33.0	52.0
2	光丽霞	第三军医大学新桥医院医学实验技术中心	18	49	3.0	6.0
3	张克斌	第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室	29	184	7.0	13.0
4	周世文	第三军医大学新桥医院医学实验技术中心	32	375	9.0	18.0
5	戢福云	第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所全军呼吸病研究重点实验室	27	117	7.0	9.0