体外转录法制备西尼罗河热病毒RNA片段

• 作者: 包静月 孙成友 张永强 李金明 王君玮 王志亮 赵永刚 邹艳丽
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 西尼罗河热病毒 T7启动子 体外转录
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 29-31
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 1902字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2011.12.014

摘要

目的通过体外转录获得西尼罗河热病毒保守区基因的RNA片段，为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计西尼罗河热病毒基因保守区克隆引物，PCR从合成的基因DNA获得相应片段，连接至质粒PGEM．T-easy上并筛选阳性重组质粒，测序鉴定后酶切线性化，用T7RNA聚合酶进行体外转录，得到固定长度的RNA片段，DNase酶处理后测定浓度，梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含西尼罗河热病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段，质量浓度分别为352．6ng／μL，RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为西尼罗河热病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。