病毒性出血性败血症病毒RNA标准物质的研制

• 作者: 刘志玲 吴晓薇 朱道中 林志雄 段燕喻 田纯见 罗琼 陈茹
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 病毒性出血性败血症 实时定量RT-PCR 标准物质
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文

摘要

利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质.设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品.初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物.采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定性试验表明室温20℃～ 25℃(相对湿度20％～ 25％)7d,2℃～8℃保存1个月及-20℃保存6个月的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为(6.625 ±0.149)×108 copies/μL,可用作VHSV核酸检测的标准质控品.