体外骨髓基质干细胞中腺病毒介导的胶质细胞源性神经营养因子基因的表达及其生物学活性

• 作者: 彭松林 方煌 胡宁 蔡卫东 赵红卫 陈安民 黎逢峰
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒科 干细胞 脑源性神经营养因子 基因 转染
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 230-232
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2
• 字数: 1535字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.06.042

摘要

背景:骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是外源性目的基因的良好靶细胞,在脊髓损伤的修复中具有良好的应用前景.目的:观察重组腺病毒介导的胶质细胞源性神经营养因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)基因在体外培养的骨髓基质干细胞中的表达,并探讨其生物学活性.设计:以细胞为研究对象,对照观察性研究.单位:一所大学医院骨科实验室.材料:实验于2004-03/06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成.SD大鼠24只,雌雄不限,体质量(180±20)g.干预:用重组腺病毒载体Adv-GDNF感染体外培养的BMSCs,并与脊髓背根神经节共培养.免疫荧光化学的方法检测BMSCs中的GDNF的表达,提取细胞总RNA进行RT-PCR扩增GDNF基因,应用ELISA方法检测其培养上清中的GDNF含量,并通过与脊髓背根神经节共培养观测GDNF的活性.主要观察指标:主要结局:①RT-PCR.②免疫荧光结果.③GDNF的体外活性.次要结局:①BMSCs的培养与鉴定.②ELISA检测蛋白表达与时间的关系.结果:免疫荧光显示Adv-GDNF感染BMSCs 48 h后即有GDNF的表达,体外培养的BMSCs经Adv-GDNF转染后有GDNF的转录,其培养上清应用ELISA方法分析,在感染24 h后即有GDNF的表达,并可持续5～7 d的高峰.Adv-GDNF感染的BMSCs的培养液上清可以促进脊髓背根神经节大量轴突的生长.结论:Adv-GDNF基因可以在BMSCs中稳定、高效表达,其表达的GDNF具有促进轴突生长的活性,为GDNF基因治疗脊髓损伤的研究奠定了基础.