肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的克隆、表达、纯化及生物学活性鉴定

• 作者: 于婷 付玲 李建民 杨秀旭 樊红艳 陈薇
• 来源期刊: 西北国防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子 TRAIL 原核表达 纯化 凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 96-98
• 页数: 3页
• 分类号: R73.362
• 字数: 1890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-8622.2006.02.006

摘要

目的:在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段(soluble TNF-related apoptosis-inducing Ligand, sTRAIL),并鉴定其生物学活性.方法:以人胎盘cDNA为模板,根据GenBank中序列NM_003810设计引物,以PCR方法扩增sTRAIL基因,将其克隆入pET-32a,转化BL21(DE3),IPTG诱导后,收集菌体,超声破碎,离心取上清纯化,鉴定其生物学活性.结果:表达载体经DNA测序鉴定,氨基酸序列与预期一致.宿主菌高效表达目的蛋白,经SDS-PAGE、氨基酸测序鉴定均正确.可溶部分占表达总量的20%.经过两步纯化,sTRAIL纯度达到95%,表达量可达20 mg/L培养基.纯化产物在体外能够明显诱导L929、NCI157、BEL7402、DU145等细胞凋亡,Hela细胞不敏感.对于L929,其半数致死量为0.10 μg/ml.结论:本研究在原核表达系统中表达了sTRAIL,获得高纯度sTRAIL蛋白,为其进一步研究提供了良好基础.