多肽 pd20与肿瘤坏死因子α融合蛋白的纯化及生物学活性鉴定

• 作者: 呼圣娟 姜荣兴 师红利 沈皓 谢华红
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 融合蛋白质类 pd20 肿瘤坏死因子 α 纯化 生物学活性
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 论 著 Original Research
• 页码范围: 1358-1361,1365
• 页数: 5页
• 分类号: R735.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2014.12.008

摘要

背景多肽 pd20是具有胃癌肝转移导向性的新多肽分子，为研究其是否具有携带抗癌药物或抑癌基因靶向性治疗胃癌肝转移的作用，本研究将其与肿瘤坏死因子α（TNF -α）进行基因融合，构建原核表达载体，对重组融合蛋白进行诱导表达。目的将 pd20- TNF -α融合蛋白进行蛋白纯化，并对纯化后蛋白进行鉴定和生物学活性检测。方法用 Ni - NTA 柱法纯化 pd20- TNF -α融合蛋白并进行 Western blotting 检测；采用 L929细胞毒法进行 pd20-TNF -α融合蛋白的生物学活性检测；用流式细胞术检测不同浓度融合蛋白作用于胃癌肝高转移潜能细胞 XGC9811- L的早期凋亡率，此实验分为5组：pd20- TNF -α100,00、25,00、6,25 U/ ml 分别为 A、B、C 组，不加融合蛋白的为D 组，流式细胞凋亡的 KB 组为 E 组；细胞侵袭实验观察融合蛋白对胃癌肝高转移潜能细胞 XGC9811- L 转移能力的影响，此实验分为4组：pd20- TNF -α组、TNF -α组、XGC9811- L 组和对照肽组。结果通过 Ni - NTA 柱纯化，在咪唑浓度为200 mmol/ L 时获得纯化的目标 pd20- TNF -α融合蛋白，蛋白纯度可达92%；纯化后的蛋白具有与抗TNF -α单抗结合的能力。L929细胞毒法显示：pd20- TNF -α融合蛋白对 L929细胞有明显的杀伤力，杀伤活性可达7,6×106 U/ ml。凋亡实验显示：A ~ E 5组细胞早期凋亡率间有差异〔（9,04±0,08）%、（6,96±1,21）%、（5,99±0,02）%、（0,73±0,02）%、（0,01±0,00）%；F =2,57，P <0,05〕。细胞侵袭实验显示：pd20- TNF -α组、TNF -α组、XGC9811- L 组、对照肽组单位时间内的穿膜细胞数有差异〔（26,5±5,9）、（36,0±3,2）、（63,5±5,0）、（64,0±6,8）个；F =49,87，P <0,01〕。结论本研究成功纯化了 pd20- TNF -α融合蛋白，并证实该蛋白有明显的生物学活性，具有促进胃癌细胞早期凋亡和抑制胃癌细胞侵袭的能力。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈皓	银川市第一人民医院消化内科	4	5	1.0	2.0
2	姜荣兴	银川市第一人民医院放射科	5	10	1.0	3.0
3	师红利		3	0	0.0	0.0
4	谢华红		1	0	0.0	0.0