肝靶向肽-人肿瘤坏死因子融合基因的克隆、可溶性表达及鉴定

• 作者: 佟陈昀颢 郭平 马艳
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CSP-TNFα 克隆 可溶性表达 鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 118-123
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2019101510

摘要

目的 获得可溶性且纯度高的肝靶向肽-人肿瘤坏死因子融合蛋白.方法 首先以HepG2 cDNA为模板,RT-PCR克隆人肿瘤坏死因子(TNFα)基因,SOEing PCR扩增肝靶向肽-人肿瘤坏死因子(CSP-TNFα)融合基因,通过双酶切连接构建融合基因原核表达载体,利用ProtParam对原核表达载体中CSP-TNFα开放阅读框进行生物信息学分析,最后进行可溶性表达和Ni柱纯化并SDS-PAGE和Western-blot鉴定.结果 获得TNFα基因序列、CSP-TNFα融合基因和表达载体CSP-TNFα/pET21b;融合基因编码融合蛋白CSP-TNFα含有肝靶向肽CSPⅠ-plus-人肿瘤坏死因子TNFα-纯化标签6*His,稳定性较好,有利于原核系统表达.在20℃,诱导20 h,融合蛋白CSP-TNFα可溶性表达成功;纯化后融合蛋白纯度约97％.结论 成功克隆肝靶向肽-人肿瘤坏死因子CSP-TNFα融合基因,并获得较纯的可溶性CSP-TNFα融合蛋白,为下一步研究其生物学活性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	佟陈昀颢	广东药科大学公共卫生学院	1	0	0.0	0.0
2	郭平	广东药科大学生命科学与生物制药学院	2	0	0.0	0.0
3	马艳	广东药科大学生命科学与生物制药学院	8	10	1.0	3.0