抗弓形虫P30单克隆抗体的制备及其抗虫作用观察

• 作者: 付婷霞 刘克义 崔勇 李瑾 柏雪莲 王用斌 韩广东 魏庆宽 黄炳成
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 P30 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 488-493
• 页数: 6页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2006.06.009

摘要

制备抗弓形虫天然P30、重组P30的单克隆抗体(mAb),并研究它们对虫体的影响,为弓形虫病诊断及保护性抗原鉴定奠定基础.采用弓形虫天然P30、重组P30及全虫抗原(对照)分别免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选稳定分泌高滴度mAb的杂交瘤细胞株.用ELISA法测定mAb亚类和效价;通过SDS PAGE和West-ern blot进行特异性鉴定;Giemsa染色观察杂交瘤细胞的染色体数目;利用扫描电镜及间接荧光抗体试验(IFAT)观察mAb对弓形虫的杀伤作用及其靶抗原定位.结果表明,筛选出2株(2B3、1H6)特异性较好、能稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株.Western blot结果显示,2B3、1H6产生的mAb与弓形虫全抗原的阳性反应带均在30 000 Mr处;mAb亚类均属IgM,其效价(ELISA)分别为:2B3 1:102 400、1H6 1:51 200;2株细胞的染色体数均在100条以上.电镜观察与mAb作用后的弓形虫虫体聚集、肿胀,膜变厚,表面出现缺口和空洞,甚至虫体变形、破碎.抗弓形虫天然P30的mAb能识别重组体pET 30a-P30的表达蛋白.成功制备了抗弓形虫天然P30、重组P30的mAb,可进一步用于弓形虫病诊断及保护性抗原鉴定研究.