HLCDG1基因siRNA表达质粒的构建及其对A549细胞周期和增殖的影响

• 作者: 刘孝荣 吕辉 李峰 欧阳咏梅 贺智敏 邹飞雁 陈主初
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,HLCDG1 短小干扰双链RNA A549细胞 细胞周期
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1256-1262
• 页数: 7页
• 分类号: R739.62
• 字数: 5275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.07.002

摘要

目的:本研究旨在应用RNA干扰技术,诱导转基因肺癌细胞HLCDG1基因沉默并观察其对肺癌细胞周期和增殖的影响.方法:构建HLCDG1基因短小干扰双链RNA表达载体,筛选HLCDG1基因表达沉默的肺癌细胞株并应用MTr和流式细胞仪分析这一肺癌细胞株增殖和细胞周期分布状况.结果:根据siRNA表达载体的设计原则,构建了能在哺乳动物细胞稳定表达的siRNA载体5个(4个位点匹配实验组和1个位点错配对照组),依次命名为pHL-si-1、pHL-si-2、pHL-si-3、pHL-si-4和pHL-si-c.上述载体分别与表达HLCDG1的重组体pcDNA3.1(+)/HLCDG1共转染A549细胞,筛选到一株共转染pHL-si-1载体和pcDNA3.1(+)/HLCDG1重组体的A549细胞,它几无HLCDG1基因表达,这株细胞暂命名为A549-HLCDG1-si-1.MTT和流式细胞仪分析表明,A549-HLCDG1-si-1细胞增殖能力明显提高,进入S期和G2+M期增多,滞留G1期减少.结论:采用RNAi技术特异阻断HLCDG1基因表达,验证了HLCDG1基因对A549肺癌细胞有生长抑制作用.