Survivin基因siRNA真核表达载体的构建及其对转染膀胱癌细胞Survivin表达的抑制作用

• 作者: 亓林 吴奎 曹正国 朱明 肖峻 舒启安 董晓程 诸禹平
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA 膀胱肿瘤 survivin 反义寡核甘酸 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（22）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1697-1700
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3606字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5269.2006.22.006

摘要

目的:构建针对Survivin基因的siRNA(small interference RNA)真核表达载体,并观察其对转染的膀胱癌细胞中Survivin基因表达和细胞凋亡的影响.方法:应用siRNA设计软件设计针对Survivin基因的特异性短链寡核甘酸,化学合成后经退火形成双链siRNA模板,通过克隆到质粒pSilencer 1.0-U6构建siRNA真核表达载体并用酶切和测序鉴定;然后将其转染人膀胱癌细胞株BIU-87,以反义Survivin寡核甘酸(ASODN)抑制效果为对照,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和DNA原位末端标记(TUNEL)法检测BIU-87细胞生长抑制率(IR)和凋亡指数(AI),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测BIU-87细胞中Survivin mRNA及其蛋白的表达.结果:酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功.siRNA对BIU-87细胞的IR和AI(62.14%和33.77%)均分别显著高于ASODN(39.33%和23.98%)和空白对照组(1.98%和3.75%),P均＜0.05,Survivin mRNA及其蛋白相对表达水平均显著低于ASODN和空白对照组.结论:构建的siRNA真核表达载体能有效地抑制Survivin mRNA的转录和表达,诱导BIU-87细胞凋亡和抑制细胞生长,为膀胱肿瘤的基因治疗提供新的方法和手段.