有效抑制T24细胞survivin表达的小RNA筛选及其载体构建

• 作者: 武睿毅 王国民 胡骁轶
• 来源期刊: 中国临床医学
• 学科: 医学
• 关键词: 小干扰RNA 存活素 膀胱肿瘤 质粒栽体
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 泌尿
• 页码范围: 693-696
• 页数: 4页
• 分类号: R737.14
• 字数: 3768字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6358.2007.05.035

摘要

目的:筛选有效抑制T24细胞survivin表达的siRNA序列,并构建其质粒载体,为后续研究提供基础.方法:设计并合成针对survivin的siRNA,转染T24细胞.用RT-PCR方法测定干扰后细胞survivin mRNA表达,Western-blot方法测定干扰后survivin蛋白表达,比较其抑制率,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA,并构建相应的质粒载体(shRNA).结果:①siRNA转染T24细胞有较高的转染效率;②半定量RT-PCR:1号siRNA干扰T24细胞48 h后survivin基因mRNA表达最低,有显著差异(P＜0.05),抑制率70%左右.③Western-blot:1号siRNA干扰T24细胞72 h后survivin蛋白表达最低,有显著差异(P＜0.05),抑制率60%左右.④Western-blot方法测定T24细胞转染1号siRNA后连续7 d survivin蛋白表达量变化:干扰后48～96 h survivin蛋白表达量最低,有显著差异(P＜0.05).⑤以1号siRNA序列构建质粒栽体并转染T24细胞成功,转染效率较高,质粒本身对细胞无毒无害.结论:①所设计、合成的siRNA中,1号survivin-siRNA对T24细胞survivin表达有明显抑制作用;②根据实验结果构建的质粒裁体及其对照质粒可用于T24细胞转染,供进一步实验研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王国民	复旦大学附属中山医院泌尿外科	232	1662	20.0	30.0
2	武睿毅	复旦大学附属中山医院泌尿外科	19	53	5.0	6.0
3	胡骁轶	复旦大学附属中山医院泌尿外科	25	78	5.0	7.0