噬菌体PaP3推定基因tls核酸内切酶活性的初步验证

• 作者: 周莹冰 张克斌 李明 申晓冬 胡晓梅 胡福泉
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 末端酶大亚单位 细菌噬菌体PaP3 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 196-198
• 页数: 3页
• 分类号: R394.8
• 字数: 3129字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2006.03.007

摘要

目的对BLAST推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3的tls基因功能进行实验验证.方法采用PCR方法从噬菌体PaP3基因组扩增出tls基因,克隆至pMD18-T载体中,再经酶切纯化后将目的基因插入表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后收集包涵体,并用裂解缓冲液溶解包涵体蛋白.然后利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白,通过透析使H6-TLS复性.最后构建含有末端酶大亚基酶切位点的底物质粒pMD-cos,检测复性蛋白活性.结果通过上述方法,成功构建了pQE-tls表达载体,融合蛋白H6-TLS表达量占菌体总量的30%.同时成功构建了目的蛋白的底物质粒pMD-cos.经由亲和层析初步纯化及透析复性后,H6 TLS可检测出核酸内切酶的活性,能将底物质粒部分线性化.结论成功地获得了具有内切酶活性的H6 TLS融合蛋白,为tls基因的认证提供了实验证据,为进一步鉴定和利用该基因奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张克斌	新桥医院医学实验技术中心	1	2	1.0	1.0