转基因水稻潮霉素标记基因PCR检测方法的建立及其在基因水平转移研究中的应用

• 作者: 吴永宁 周萍萍 张建中 沈立明 魏晓丽
• 来源期刊: 中国食品卫生杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 植物,转基因 基因 基因水平转移 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 193-196
• 页数: 4页
• 分类号: R155.2|TS201.6|Q943.2
• 字数: 3494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-8456.2006.03.001

摘要

为建立用于基因水平转移研究, 尤其是DNA经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基因hpt(hygromycin phosphotransferase)的定性和实时定量PCR体系,设计针对hpt的上游通用引物多个片段定性PCR扩增体系,以植物叶绿体基因rbcl为内对照,PCR扩增产物经测序验证.将定性PCR中最小片段(236 bp)连接到质粒载体pUC18-pMD T载体上,提取质粒经验证后做外标.应用TaqMan-MGB荧光探针和引物,建立定量的外标校正曲线法,并评价方法的精密度.建立的定性PCR体系能稳定扩增出236 bp～910 bp不同大小的5个hpt片段,并经测序验证.实时定量PCR的线性范围为105～10拷贝(R2=0.998),最低能检出10拷贝,重复性好.本研究已成功建立了用于转基因水稻标记基因hpt基因水平转移研究的定性和定量PCR系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴永宁	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	144	2044	25.0	34.0
2	张建中	中国疾病预防控制中心传染病控制所	140	649	13.0	18.0
3	沈立明	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	5	25	3.0	5.0
5	周萍萍	中国疾病预防控制中心营养与食品安全所	8	114	6.0	8.0
6	魏晓丽	中国科学院遗传与发育生物学研究所	14	252	9.0	14.0