心肌特异性表达人KCNE4转基因小鼠模型的建立

• 作者: 刘懿 杨奕清 林捷 董雄剑 陈义汉
• 来源期刊: 同济大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: KCNE4 转基因 心律失常 小鼠
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R541.7+5
• 字数: 3589字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0392.2006.06.001

摘要

目的 本研究旨在建立心肌特异性表达人KCNE4(hKCNE4)基因小鼠模型,为探索hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用奠定基础.方法 通过RT-PCR克隆hKCNE4基因,使用核酸内切酶和连接酶构建hKCNE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone26,经过酶切鉴定、序列分析证实无误后用BamHI酶切获得转基因表达元件hKCNE4-α-MHC-hGH pA.将hKCNE4-α-MHC-hGH pA显微注λ小鼠受精卵雄性原核,并将有活力的受精卵移植到代孕小鼠的输卵管.PCR鉴定出代孕鼠所生小鼠中转基因阳性原代(G0)小鼠,运用RT-PCR测序技术对阳性G0小鼠与野生型小鼠交配所生的一代(G1)小鼠进行检测以识别出表达转基因的阳性小鼠.结果 成功克隆了hKCNE4基因,正确构建了hKCNE4基因心肌特异性表达载体hKCNE4-α-MHC-Clone 26.代孕鼠共生产86只仔鼠,9只转基因阳性,2只(分别称其为LineA和Line B)转基因在心脏中高表达.对Line A和Line B的阳性后代进行初步表型分析发现其生长发育良好,繁殖力正常,体表心电图无明显异常.结论 成功建立心肌特异性表达hKCNE4转基因小鼠模型,为进一步研究hKCNE4基因对特定类型心房颤动的防治作用提供了一种工具.