HCV亚基因复制子支持细胞的筛选

• 作者: 吴英松 李明 董文其 邬刚 陈白虹
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HCV 亚基因复制子 哺乳动物细胞
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏
• 页码范围: 514-517,封四
• 页数: 5页
• 分类号: R512.63
• 字数: 3508字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2006.05.012

摘要

目的寻找新的支持HCV亚基因复制子复制的支持细胞,为研究HCV复制机制、HCV与宿主间的关系,及建立HCV缺陷病毒培养体系提供材料储备.方法质粒pNNeo3-5B含HCV-N亚基因复制子cDNA,该复制子RNA能在Huh7细胞中有效复制.缺失其中的BsaB Ⅰ-Hpa Ⅰ片段(含NS5B的GDD基序),生成缺陷型复制子质粒pNNeo3-5B(△).将以上两个质粒线性化后体外转录出复制子RNA:rNNeo3-5B和rNNeo3-5B(△).将rNNeo3-5B电转染Huh7、SMMC7721、HepG2、BEL7402、Lo2、CBRH7919、BHIK21、Vero E6、293和293T等细胞,以G418筛选3周,观察克隆形成情况,并检测克隆中HCV特异性RNA和蛋白.结果在CBRH7919和BHK21获得G418抗性克隆,转染rNNeo3-5B(△)的细胞和未转染复制子的细胞则全部死亡.RT-PCR检测证实各克隆都含有HCV 5'NTR和新霉素磷酸转移酶基因,间接免疫荧光和Western blot检测证实有大量表达的HCV NS3和NS5A蛋白,未转染复制子的细胞全为阴性.结论本研究证实CBRH7919和BHK21能支持HCV复制子的自主复制,可作为建立HCV病毒培养体系的备选材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈白虹	南方医科大学生物技术学院	15	19	3.0	3.0
2	李明	南方医科大学生物技术学院	212	862	14.0	18.0
3	吴英松	南方医科大学生物技术学院	123	499	11.0	16.0
4	董文其	南方医科大学生物技术学院	43	142	6.0	9.0
5	邬刚	南方医科大学生物技术学院	4	16	2.0	4.0